Reprezentatywne wyniki pochodzą z potrójnych próbek w co najmniej 2 niezależnych eksperymentach. In vivo działanie gefitinibu na alloprzeszczepy AtT20 z nadekspresją EGFR. Aby ocenić wpływ gefitynibu in vivo, transfektanty EGFRWT lub EV zaszczepiono sc do 7-tygodniowych samic nagich myszy (NU / J) randomizowanych do otrzymywania doustnego gefitinibu (100 mg / kg / dzień) lub nośnika. Leczenie lekiem rozpoczęto 3 dni po inokulacji komórkowej (1 x 106 komórek / mysz). Jak pokazano na Figurze 6, A i B, wytworzone w ten sposób nowotwory wykazujące ekspresję EGFR były większe niż kontrole (~ 3-krotnie, P <0,01), i ten wzrost nowotworu był hamowany przez traktowanie gefitinibem (~ 40%, P <0,01). . Podwyższony poziom kortykosteronu w surowicy w grupie EGFR (432. 52 ng / ml vs. 186. 12 ng / ml; P <0,01) również był osłabiony przez doustny gefitinib (~ 35%, P <0,05; Figura 6C). Myszy, którym wstrzyknięto transfektanty EGFR wykazywały cechy hiperkortyzolemii, w tym centralne nagromadzanie tłuszczu, hiperglikemię i przyrost masy ciała, z których wszystkie były osłabione przez doustne leczenie gefitinibem (Figura 6, Dł F). Warto zauważyć, że u myszy, którym wstrzyknięto kontrolne komórki AtT20 pozbawione EGFR, stężenie kortykosteronu w surowicy, nagromadzenie tłuszczu, poziomy glukozy i masę ciała nie zostały zmienione przez doustne leczenie gefitinibem. Figura 6 Gefitinib osłabia wzrost guza EGFR i wydzielanie hormonu in vivo. EGFRWT (1 x 106 komórek / mysz, 0,1 ml z matrigelem) lub transfektanty EV wstrzyknięto sc 7-tygodniowym nagim myszom. 3 dni po inokulacji myszy z EGFR lub nowotworami kontrolnymi otrzymywały zaróbkę (0,5% metylocelulozy i 0,5% tween80 / PBS) lub gefitinib (100 mg / kg) przez 10 dni. (A) We wskazanych dniach po leczeniu objętość guza zmierzono suwmiarką i obliczono jak w Metodach. (B) Po eutanazji guzy zostały wycięte i zważone. (C) Poziomy kortykosteronu w surowicy mierzono metodą RIA. (D) Orekalny tłuszcz był bardziej widoczny w wstrzykniętych EGFR niż myszy kontrolne. Mysia masa ciała (E) i poziomy glukozy w osoczu (F) były mierzone po eutanazji. Wartości są średnie. SEM. * P <0,05; ** P <0,01. Dyskusja Ukierunkowana terapia medyczna gruczolaków przysadki produkujących ACTH jest jednym z najważniejszych bieżących wyzwań w leczeniu pacjentów z nowotworami endokrynnymi. Tutaj badaliśmy rolę EGFR w guzach przysadki mózgowej. W ludzkich guzach Cushinga, gefitinib hamował ekspresję POMC o około 95%, a te efekty leku potwierdzono przy użyciu psich komórek gruczolaka kortykotropowego. Psy zależne od przysadki hiperadrenokortykalne (PDH) w dużym stopniu rekapitulują chorobę Cushinga u ludzi i są powszechnie spotykane. Objawy kliniczne są w większości podobne do choroby u ludzi, w tym otyłości centralnej, apetytu drapieżnego, poliurii, polidypsji, cienkiej skóry, charakterystycznej. Potbelly. wygląd i utrata włosów (31). W niniejszym badaniu zahamowanie aktywności kinazy EGFR w hodowlach komórek nowotworu psowatego hamowało 80% ekspresji POMC i 75% wydzielania ACTH. Jednak zaobserwowana normalizacja wydzielania ACTH in vitro. do poziomów wstępnej obróbki. niekoniecznie dokładne, ponieważ rozerwanie komórek może uwalniać wydzielane granulki, co skutkuje wyższymi pomiarami średniego ACTH. Wyniki PCR w czasie rzeczywistym, bardziej czuła miara mRNA POMC, były podobnie tłumione przez gefitynib. Komórki nowotworowe pochodzące od psów i 2 nie reagowały na gefitynib i nie wyrażały EGFR, co sugeruje, że działanie gefitinibu hamujące hormon w guzach psich pośredniczy w EGFR. Pies 11 wykazywał najwyższe poziomy ekspresji EGFR, a efekt supresji na poziomach genu POMC wydawał się silny. Jednak ACTH nie był osłabiony w hodowli, co prawdopodobnie sugeruje zaburzenie komórek (29). Ekspresja Pomc i wydzielanie ACTH były wyraźnie indukowane przez EGF w sposób zależny od EGFR, a promotor Pomc był również aktywowany przez sygnalizację EGFR. Zróżnicowana aktywność promotora Pomc jest regulowana przez złożone mechanizmy zachowane przez kilka czynników transkrypcyjnych, w tym podrodzinę receptora jądrowego 4 (Nur), STAT3, różnicowanie neurogenne (NeuroDl), Tpit, Pitx1, NF-kB, białko wiążące element odpowiedzi cAMP (CREB). ) i receptora glukokortykoidowego (GR) (32. 37). Wyjaśniliśmy mechanizmy leżące u podłoża indukcji przez EGF aktywności promotora Pomc i wykazano zależność MAPK od sygnalizacji EGFR, która również wymagała elementu 323 do około 200 bp, który znajduje się w pobliżu miejsca inicjacji Pomc (poniżej MAPK) i zawiera specyficzny dla tkanki Tpit. / Witryny Pitx (38). Gefitynib hamował aktywność promotora Pomc i wydzielanie ACTH w sposób zależny od EGFR. Gefitynib również indukował apoptozę i hamował proliferację transfektantów AtT20 [podobne: lava club warszawa opinie, leczenie jodem radioaktywnym, podstawowe potrzeby człowieka ] [patrz też: urszula grabowska nudografia, molekin d3, pytania quarhodrona ]
